簡介

MTT實驗，全稱為3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四氮唑溴鹽比色法，是一種常用于檢測細(xì)胞存活和生長的體外實驗方法。該方法基于活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能夠?qū)⑼庠葱訫TT還原成不溶于水的藍(lán)紫色結(jié)晶甲臜（Formazan），而死細(xì)胞缺乏這種功能。通過測定溶液中甲臜的光吸收值，可以間接反映活細(xì)胞的數(shù)量。MTT實驗因其靈敏度高、經(jīng)濟(jì)實用而被廣泛應(yīng)用于生物活性因子的活性檢測、抗腫瘤藥物篩選、細(xì)胞毒性試驗以及腫瘤放射敏感性測定等領(lǐng)域。

實驗步驟

  1.細(xì)胞培養(yǎng)：將對數(shù)生長期的細(xì)胞接種到96孔板中，并在適宜的條件下培養(yǎng)至細(xì)胞單層鋪滿孔底。

  2.藥物處理：向含有細(xì)胞的孔中加入不同濃度的測試藥物，并繼續(xù)培養(yǎng)一段時間。

  3.MTT添加：向每個孔中加入MTT溶液，繼續(xù)培養(yǎng)以允許活細(xì)胞將MTT還原。

  4.終止培養(yǎng)：停止培養(yǎng)后，去除孔內(nèi)的培養(yǎng)液，并用二甲基亞砜（DMSO）溶解甲臜結(jié)晶。

  5.比色測定：在酶聯(lián)免疫檢測儀上測定各孔的吸光度值，通常在490nm或570nm波長處進(jìn)行測量。

  6.數(shù)據(jù)分析：根據(jù)吸光度值計算細(xì)胞的相對生存分?jǐn)?shù)或抑制率，并進(jìn)一步分析藥物的效力。

注意事項

  1.MTT溶液應(yīng)現(xiàn)配現(xiàn)用，并在避光條件下保存。

  2.實驗過程中應(yīng)避免交叉污染，并注意使用無菌技術(shù)。

  3.在離心和吸液步驟中，應(yīng)輕柔操作以保護(hù)細(xì)胞。

  4.溶解結(jié)晶物時，應(yīng)充分振蕩以確保wanquan溶解。

  5.實驗結(jié)果的線性范圍通常建議在OD值0-0.7之間。

  6.MTT法只能用來檢測細(xì)胞的相對數(shù)和相對活力，不能直接測定細(xì)胞的絕對數(shù)。