HE染色實驗,全稱為蘇木精和伊紅染色方法,是病理學染色技術(shù)中最基本也是最重要的一種。該方法通過區(qū)分細胞核和細胞質(zhì)的酸堿性特性,將它們分別染成藍色和紅色,從而滿足形態(tài)學觀察的需求。
蘇木精為堿性天然染料,可使細胞核著色。細胞核內(nèi)染色質(zhì)的成分主要是DNA,DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)中,兩條核苷酸鏈上的磷酸基向外,使DNA雙螺旋的外側(cè)帶負電荷,呈酸性,很容易與帶正電荷的蘇木精堿性燃料以離子鍵或氫鍵結(jié)合而被染色。蘇木精在堿性溶液中呈藍色,所以細胞核被染成藍色。
細胞漿內(nèi)主要成分是蛋白質(zhì),為兩性化合物。細胞漿的染色與pH值有密切關(guān)系。伊紅Y是一種化學合成的酸性染料,在水中離解成帶負電荷的陰離子,與蛋白質(zhì)的氨基正電荷(陽離子)結(jié)合而使細胞漿染色,細胞漿、紅細胞、肌肉、結(jié)締組織,嗜伊紅顆料等被感染成不同程度的紅色或粉紅色,與藍色的細胞核形成鮮明的對比。
1、切片制備
切片厚度大?。呵衅暮穸群痛笮绊懭旧Ч?,因此需要根據(jù)實驗需求選擇合適的切片。
固定清洗:將切片放入固定液中以防止組織中的水分蒸發(fā),并保持組織結(jié)構(gòu)的完整性。常用的固定液包括甲醛、乙醇等。之后用清水清洗切片,去除固定液的影響。
2、固定清洗
樣品制備:對于貼壁生長的細胞,胰酶消化后調(diào)整細胞濃度滴加于蓋玻片上,培養(yǎng)相應時間后取出并用PBS洗滌。
樣品固定:用95%乙醇固定20分鐘,再用PBS洗滌兩次。
3、染色沖洗
染核:用蘇木素染液染色2-3分鐘,之后用自來水沖洗。若染色過深,可用1%鹽酸酒精溶液分色,再水洗。
染胞質(zhì):浸入伊紅染液染色1分鐘,再次用自來水沖洗。
4、封固觀察
封固:吹干或自然晾干細胞爬片后,使用中性樹膠封片。
鏡檢觀察:在顯微鏡下觀察染色效果。若染色不均勻或顏色不鮮明,可能需要調(diào)整染色時間和分化時間。